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生物、藥物分析檢驗崗位知識|生物、藥物分析中的樣品前處理方法匯總
生物、藥物分析中的樣品前處理方法匯總:樣品前處理對樣品的分析起著至關(guān)重要的左右,某種程度上來說,前處理 決定了分析測試的結(jié)果,本文為大家呈現(xiàn)常見樣品前處理方法.樣品前處理對分析檢測實驗員來說是至關(guān)重要的一環(huán),其占據(jù)整個分析過程的60%以上的時間,主要的分析誤差也是來自樣品前處理環(huán)節(jié)。
生物、藥物分析中為什么要進(jìn)行樣品前處理?
1、富集濃縮被測痕量組分(ppm,ppb, ppt 級)的作用,提高方法的靈敏度,
降低最小檢測限。
2、消除基體對測定的干擾,提高方法的選擇性
3、使被測組分從復(fù)雜的樣品中分離出來,制成便于測定的溶液形式
4、通過衍生化的前處理方法,可以使一些在正常檢測器上沒有響應(yīng)或響應(yīng)值較
低的化合物轉(zhuǎn)化為具有很高效應(yīng)值的化合物。
5、樣品經(jīng)前處理后就變得容易保存和運輸
6、可以除去對儀器或分析系統(tǒng)有害的物質(zhì),如強酸或強堿性物質(zhì),如生物大分
子等,延長儀器使用壽命,使分析測定能長期保持在穩(wěn)定、可靠的狀態(tài)下進(jìn)行。
生物、藥物分析中進(jìn)行樣品前處理有哪些要求
1、樣品是否要預(yù)處理,如何進(jìn)行預(yù)處理,采樣何種方法,應(yīng)根據(jù)樣品的性狀、
檢驗的要求和所用分析儀器的性能第方面加以考慮。
2、應(yīng)盡量不用或少使用預(yù)處理,以便減少操作步驟,加快分析速度,也可減少
預(yù)處理過程中帶來的不利影響,如引入污染、待測物損失等。
3、分解法處理樣品時,分解必須完全,不能造成被測組分的損失,待測組分的
回收率應(yīng)足夠高。
4、樣品不能被污染,不能引入待測組分和干擾測定的物質(zhì)。
5、試劑的消耗應(yīng)盡可能少,方法簡便易行,速度快,對環(huán)境和人員污染少。
生物樣品分析前處理
生物樣品的前處理涉及很多方面,但主要應(yīng)考慮生物樣品的種類,被測定藥物的性質(zhì)和測定方法三個方面的問題。
1.樣品的分離、純化技術(shù)應(yīng)該依據(jù)生物樣品的類型。例如,血漿或血清需除蛋白,使藥物從蛋白結(jié)合物中釋出;唾液樣品則主要采用離心沉淀除去粘蛋白;尿液樣品常采用酸或酶水解使藥物從綴合物中釋出,當(dāng)原型藥物排泄在尿中時,可簡單地用水稀釋一定倍數(shù)后進(jìn)行測定。
2.樣品于測定前是否需要純化以及純化到什么程度均與其后采用的測定方法的不同而不同。一般說來,放射免疫測定法由于具有較高的靈敏度和選擇性,因此當(dāng)初步除去主要干擾物質(zhì)之后即可直接測定微量樣品;而對靈敏度和專屬性較差的紫外分光光度法,分離要求就要相應(yīng)高一些;至于常用的高效液相色譜法,為防止蛋白質(zhì)等雜質(zhì)沉積在色譜柱上,上柱前需對生物樣品進(jìn)行去蛋白,有時對被測組分進(jìn)行提取、制備衍生物等前處理。
藥物分析中樣品前處理
根據(jù)被測定藥物的結(jié)構(gòu)、理化及藥理性質(zhì)、存在形式、濃度范圍等,采取相應(yīng)的前處理方法。藥物在樣品中的濃度相差很大,濃度大的樣品,對前處理要求可稍低;濃度越低則樣品前處理要求越高。在測定藥物及其代謝物時,樣品的前處理是十分重要的。除了少數(shù)情況,將體液經(jīng)簡單處理后進(jìn)行直接測定外,一般要在測定之前進(jìn)行樣品的前處理,即進(jìn)行分離、純化、濃集,必要時還需對待測組分進(jìn)行化學(xué)衍生化,從而為測定創(chuàng)造良好的條件。
1.GC中化學(xué)衍生化法:藥物的化學(xué)衍生化前處理對GC十分必要,衍生化可使藥物分子中的極性基團(tuán),如羥基、氨基、羧基等變成無極性的、易于揮發(fā)的藥物,從而使GC的溫度不必很高即可適合GC的分析要求。主要的衍生化反應(yīng)有烷基化、酰化、硅烷化等。其中已硅烷化用得最廣泛。 異構(gòu)體的分離也是十分重要的。分離光學(xué)異構(gòu)體的方法之一,就是采用不對稱試劑,使其生成非對映異構(gòu)體衍生物,然后用GC法或HPLC法進(jìn)行分析測定。
2.HPLC中化學(xué)衍生化法:當(dāng)采用HPLC法時,其衍生化目的是為了提高藥物的檢測靈敏度。一些在紫外、可見光區(qū)沒有吸收或者摩爾吸收系數(shù)小的藥物,可以使其與衍生成對可見-紫外檢測器、熒光檢測器及電化學(xué)檢測器等具有高靈敏度的衍生物。
小結(jié)
1.近年來發(fā)展起來的上述樣品前處理方法,應(yīng)用各有其特點,其中應(yīng)用最為普遍成熟的是固相萃取(SPE);
2.基體分散固相萃取(MSPD)對樣品的處理最為有效;
3.超臨界流體萃取(SFE)速度快、效率高、幾乎不消耗溶劑,但裝置價格昂貴,不易推廣普及。液相微萃取技術(shù)和分子印跡技術(shù) (MIT)具有廣闊的應(yīng)用前景,但國內(nèi)在這方面起步較晚,相關(guān)研究較少;微波輔助萃取(MAE)具有快速、高效節(jié)能、環(huán)境友好等特點,但目前對其機理的研究還不夠;
4.加速溶劑技術(shù)(ASE)的提取一次只能提取一個樣本,用于批量檢測需要較長的時間;膜分離樣品前處理技術(shù)具有選擇性高、溶劑用量少、準(zhǔn)確度和精密度均較高等特點,其不足是對萃取物質(zhì)有較高要求,需要優(yōu)化很多實驗條件,并且其長期穩(wěn)定性差;
5.免疫親和色譜(IAC)是目前凈化和富集效能最強的樣品處理技術(shù),但尚處探索階段,仍限于常規(guī)技術(shù)凈化困難的重要殘留組分樣品處理過程;
6.吹掃捕集技術(shù)(SCD)對環(huán)境不造成污染,具有取樣量少、富集效率高、受基體干擾小及容易實現(xiàn)在線檢測等優(yōu)點,但其除水技術(shù)尚存在較大缺陷;
7.超聲波輔助萃取(UAE)具有快速、價廉、提取率高的優(yōu)點,但這種技術(shù)目前還多是手工操作,主要用在小型實驗室,要用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)尚存在一定的困難。
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